Uji Fitokimia
Penyaringan fitokimia dilakukan untuk mendeteksi keberadaan alkaloid, flavonoid, polifenol, terpenoid, steroid/triterpenoid, dan saponin. Sebelum analisis, ekstrak metanol kering dilarutkan dalam metanol untuk membuat larutan uji.
Deteksi Alkaloid
Alkaloid dideteksi menggunakan reagen Wagner, Dragendorff, dan Bouchardat. Tiga larutan uji disiapkan dengan penambahan HCl 2N, dan masing-masing ditambahkan dengan reagen Wagner, Dragendorff, dan Bouchardat.
Keberadaan alkaloid ditunjukkan dengan munculnya endapan berwarna merah-coklat (Wagner), oranye-coklat (Dragendorff), dan coklat (Bouchardat). Setidaknya dua dari tiga tes dengan reagen yang digunakan harus menunjukkan reaksi positif untuk mengonfirmasi keberadaan alkaloid.
Deteksi Flavonoid
Untuk mendeteksi flavonoid, larutan uji ditambahkan dengan setetes aseton, serbuk asam borat, dan serbuk asam oksalat, lalu dipanaskan dengan hati-hati di atas penangas air. Residu ditambahkan dengan eter, dan diamati di bawah sinar ultraviolet dengan panjang gelombang 366 nm. Hasil positif keberadaan flavonoid ditunjukkan oleh warna kuning yang intens.
Deteksi Polifenol
Polifenol dideteksi dengan mereaksikan larutan uji dengan larutan FeCl3 5% (b/v) dalam air atau etanol. Warna biru, biru-hitam, atau biru-hijau setelah reaksi menunjukkan keberadaan polifenol.
Deteksi Terpenoid
Deteksi terpenoid dilakukan dengan reaksi Salkowski. Ke dalam tabung reaksi, larutan uji digoyangkan perlahan dengan kloroform dan asam sulfat. Jika terpenoid ada, warna merah akan muncul.
Deteksi Triterpenoid
Keberadaan triterpenoid dideteksi dengan reaksi Liebermann-Burchard. Larutan uji ditambahkan ke kombinasi kloroform, anhidrida asetat, dan asam sulfat dalam tabung reaksi. Reaksi positif ditunjukkan oleh pembentukan warna merah, hijau, biru, atau oranye.
Deteksi Saponin
Saponin dideteksi dengan mengocok ekstrak metanol secara vertikal selama 10 detik. Pembentukan busa stabil selama setidaknya 15 menit bahkan dengan penambahan HCl menunjukkan keberadaan saponin.
Berikut adalah prosedur pembuatan reagen Wagner, Dragendorff, dan Bouchardat:
Pembuatan Reagen Wagner
Reagen Wagner digunakan untuk mendeteksi keberadaan alkaloid dan terdiri dari larutan iodin dalam kalium iodida.
Bahan:
- Iodin (I2)
- Kalium iodida (KI)
- Air suling
Prosedur:
1. Timbang 1,27 gram iodin (I2) dan 2 gram kalium iodida (KI).
2. Larutkan kalium iodida dalam sekitar 5 ml air suling.
3. Tambahkan iodin ke dalam larutan kalium iodida tersebut.
4. Tambahkan air suling secukupnya untuk membuat volume total 100 ml.
Pembuatan Reagen Dragendorff
Reagen Dragendorff adalah campuran dari bismut nitrat dan natrium iodida dalam larutan asam asetat.
Bahan:
- Bismut subnitrat (Bi(NO3)3)
- Asam asetat glasial
- Kalium iodida (KI)
- Air suling
Prosedur:
1. Timbang 0,85 gram bismut subnitrat dan larutkan dalam 10 ml asam asetat glasial.
2. Larutkan 8 gram kalium iodida dalam 20 ml air suling.
3. Campurkan kedua larutan tersebut dan tambahkan air suling hingga volume total 100 ml.
Pembuatan Reagen Bouchardat
Reagen Bouchardat adalah larutan iodida kalium dan iodin dalam air.
Bahan:
- Iodin (I2)
- Kalium iodida (KI)
- Air suling
Prosedur:
1. Timbang 1 gram iodin (I2) dan 2 gram kalium iodida (KI).
2. Larutkan kalium iodida dalam sekitar 5 ml air suling.
3. Tambahkan iodin ke dalam larutan kalium iodida tersebut.
4. Tambahkan air suling secukupnya untuk membuat volume total 100 ml.
Reagen Salkowski
Reagen Salkowski digunakan untuk mendeteksi keberadaan terpenoid. Berikut adalah cara membuat reagen Salkowski:
Bahan:
- Asam sulfat pekat (H₂SO₄)
- Kloroform (CHCl₃)
Prosedur:
1. Siapkan asam sulfat pekat dan kloroform dalam wadah yang bersih dan kering.
2. Tidak perlu mencampur kedua bahan ini sebelumnya karena reaksi akan dilakukan langsung dalam proses deteksi.
Prosedur Deteksi Terpenoid dengan Reagen Salkowski:
1. Larutan Uji:
— Larutan uji (ekstrak yang akan diuji) diletakkan dalam tabung reaksi.
2. Penambahan Kloroform:
— Tambahkan kloroform ke dalam tabung reaksi yang berisi larutan uji.
— Goyangkan tabung reaksi secara lembut untuk mencampur kloroform dengan larutan uji.
3. Penambahan Asam Sulfat:
— Secara hati-hati, tambahkan beberapa tetes asam sulfat pekat ke dalam campuran dalam tabung reaksi.
— Biarkan campuran tersebut berdiri tanpa digoyangkan.
4. Pengamatan:
— Jika terpenoid ada, lapisan bawah (kloroform) akan berubah menjadi warna merah.
Pastikan selalu bekerja di dalam ruang yang berventilasi baik dan menggunakan alat pelindung diri (sarung tangan, kacamata pelindung, jas laboratorium) saat menangani asam sulfat pekat dan kloroform, karena kedua bahan ini bersifat korosif dan berbahaya.
